IP-10 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-421031-ACT

O gene murino **Cxcl10** codifica a proteína 10 induzida por interferon gama (IP-10/CXCL10), uma quimiocina CXC que sinaliza principalmente por meio do **CXCR3** para regular a quimiotaxia e o posicionamento de células T ativadas, células NK e outros subtipos de leucócitos. Sua expressão é fortemente induzida a jusante de vias de **IFN-γ** e de receptores de reconhecimento de padrões, integrando programas inflamatórios ligados a **JAK/STAT** e **NF-κB** que moldam a vigilância imune nos tecidos. A IP-10 ajuda a coordenar o tráfego de leucócitos, a ativação endotelial e a amplificação de redes de citocinas durante infecções e inflamação estéril. A sinalização desregulada de CXCL10 é frequentemente estudada em modelos de autoimunidade, neuroinflamação e interações tumor–sistema imune, nos quais o recrutamento alterado de células imunes contribui para a patologia.

IP-10 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Cxcl10 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

IP-10 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Cxcl10 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Cxcl10, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de IP-10. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Cxcl10 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de IP-10 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via IP-10 em células tumorais com expressão de Cxcl10 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.