Integrin αM/CD11b Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400563-ACT

ITGAM codifica a integrina αM (CD11b), que forma um heterodímero com ITGB2 (CD18) para constituir o recetor Mac-1/CR3, expresso predominantemente em células mieloides. Este recetor de adesão e de reconhecimento de padrões regula o rolamento de leucócitos, a adesão firme e a transmigração, e modula a fagocitose, a degranulação e a explosão oxidativa por meio de vias de sinalização “outside-in” que envolvem quinases da família Src, Syk, PI3K-AKT e MAPK. A integrina αM/CD11b também reconhece alvos opsonizados pelo complemento (iC3b) e contribui para o processamento de complexos imunes e para programas de citocinas inflamatórias. Alterações genéticas e de expressão em ITGAM estão associadas a ativação desregulada da imunidade inata e têm sido estudadas em contextos que incluem autoimunidade, inflamação crónica e a biologia de células mieloides associadas a tumores.

Integrin αM/CD11b O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ITGAM sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Integrin αM/CD11b O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ITGAM em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ITGAM, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Integrin αM/CD11b. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ITGAM nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Integrin αM/CD11b no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Integrin αM/CD11b em células tumorais com expressão de ITGAM silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.