Integrin αM/CD11b CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400563-ACT

ITGAMはインテグリンαM（CD11b）をコードしており、ITGB2（CD18）とヘテロ二量体を形成して、主に骨髄系細胞に発現するMac-1/CR3受容体を構成します。この接着・パターン認識受容体は、白血球のローリング、強固な接着、血管外遊走を制御し、Srcファミリーキナーゼ、Syk、PI3K-AKT、MAPKが関与するアウトサイドイン・シグナル伝達経路を介して、貪食、脱顆粒、酸化バーストも調節します。インテグリンαM/CD11bは補体でオプソニン化された標的（iC3b）も認識し、免疫複合体の処理や炎症性サイトカイン・プログラムにも寄与します。ITGAMの遺伝子変化や発現変動は自然免疫活性化の破綻と関連しており、自己免疫、慢性炎症、腫瘍関連骨髄系細胞の生物学などの文脈で研究されています。

Integrin αM/CD11b CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ITGAMの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Integrin αM/CD11b CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ITGAM 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はITGAM転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Integrin αM/CD11bの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のITGAM遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるIntegrin αM/CD11b依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびITGAM発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるIntegrin αM/CD11b経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。