Integrin β8/ITGB8 Double Nickase Plasmid (h): sc-401379-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Integrin β8/ITGB8 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Integrin β8/ITGB8 Double-Nickase-Plasmid (h) und Integrin β8/ITGB8 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ITGB8 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Integrin β8/ITGB8: sc-514150
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Integrin β8/ITGB8 Double Nickase Plasmid (h) | sc-401379-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Integrin β8/ITGB8 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401379-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ITGB8 kodiert Integrin β8, eine Einzelpass-Transmembran-Untereinheit eines Adhäsionsrezeptors, die mit Integrin αV zu αVβ8 dimerisiert und so Liganden der extrazellulären Matrix mit intrazellulären Zytoskelett- und Signalnetzwerken verbindet. αVβ8 ist ein zentraler Regulator der Aktivierung von latentem TGF‑β an der Zelloberfläche und formt SMAD-abhängige Transkriptionsprogramme, die epithel–mesenchymale Interaktionen, Immunmodulation und Gewebeumbau beeinflussen. Über integrinvermittelte Outside-in-Signalgebung und die Dynamik fokaler Adhäsionen trägt ITGB8 zu Zelladhäsion, Migration und Barriereorganisation bei. Eine fehlregulierte ITGB8-Expression oder αVβ8-Aktivität wurde mit veränderten TGF‑β-Signalzuständen in unterschiedlichen Kontexten in Verbindung gebracht, etwa beim Umbau der Tumormikroumgebung, bei fibrotischen Prozessen und in der neurovaskulären Entwicklung.
Integrin β8/ITGB8 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ITGB8-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ITGB8 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ITGB8-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ITGB8-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.