Integrin α8/ITGA8CRISPR激活质粒(h): sc-402020-ACT

ITGA8 编码整合素 α8（integrin α8），这是一种 α 亚基，可与 β1 形成异源二聚体，构成一种与层粘连蛋白（laminin）及细胞外基质结合的受体，从而调控细胞-基质黏附、细胞骨架组织以及机械信号转导（mechanotransduction）。整合素 α8/ITGA8 参与黏着斑（focal adhesion）信号及其下游通路，包括涉及 FAK/SRC、Rho 家族 GTP 酶和 MAPK 的信号网络，协同调控细胞迁移、分化与组织重塑。它在间充质和基质细胞相关研究中备受关注，例如肾脏发育与成纤维细胞生物学领域，在这些情境下，整合素介导的信号改变会影响细胞外基质沉积与器官形态发生。ITGA8 表达或整合素信号的失调与纤维化表型及肿瘤微环境重塑相关，因此在研究侵袭、黏附依赖性存活以及由基质驱动的转录程序时具有重要意义。

Integrin α8/ITGA8 CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性ITGA8的表达。

Integrin α8/ITGA8 CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的ITGA8基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于ITGA8转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性Integrin α8/ITGA8表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的ITGA8位点，并能够研究内源性位点上依赖于Integrin α8/ITGA8的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在ITGA8表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟Integrin α8/ITGA8通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。