Integrin β6/ITGB6 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400999-ACT

ITGB6 codifica a subunidade β6 da integrina, que se associa à integrina αV para formar o heterodímero αVβ6, responsável por mediar a adesão de células epiteliais a ligantes da matriz extracelular e por regular migração, polaridade e remodelamento tecidual. A αVβ6 é um ativador dependente do contexto do TGF-β latente por meio de interações com proteínas contendo RGD, conectando o ITGB6 à sinalização TGF-β/SMAD, à transição epitélio-mesenquimal e a programas de reparo de feridas. A expressão aberrante de ITGB6 e a função da αVβ6 têm sido associadas ao remodelamento fibrótico e à invasão e metástase associadas a tumores em diversos cânceres epiteliais, nos quais pode modular o microambiente local e a sinalização inflamatória. Como receptor de superfície que integra sinais da MEC com a sinalização intracelular, o ITGB6 é frequentemente utilizado para estudar mecanotransdução, comunicação célula–matriz e respostas transcricionais induzidas por TGF-β.

Integrin β6/ITGB6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ITGB6 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Integrin β6/ITGB6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ITGB6 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ITGB6, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Integrin β6/ITGB6. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ITGB6 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Integrin β6/ITGB6 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Integrin β6/ITGB6 em células tumorais com expressão de ITGB6 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.