Integrin β5/ITGB5 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401017-ACT

ITGB5 codifica a integrina β5, um recetor de adesão transmembranar que forma um heterodímero com a integrina αV para gerar a αVβ5, ligando ligandos da matriz extracelular ao citoesqueleto de actina e iniciando sinalização do tipo outside-in. A integrina β5 regula a dinâmica das adesões focais, a migração celular e a sobrevivência através de vias que incluem FAK/SRC, PI3K–AKT e MAPK, com funções adicionais na endocitose e no crosstalk com programas mediados por TGF-β. Ao modular as interações célula–matriz e a mecanotransdução, a ITGB5 influencia o comportamento epitelial e endotelial, o tráfego de células imunitárias e a remodelação do microambiente tumoral. A expressão ou sinalização desregulada de ITGB5 tem sido associada a invasão, angiogénese, remodelação relacionada com fibrose e fenótipos metastáticos em múltiplos contextos de doença.

Integrin β5/ITGB5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ITGB5 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Integrin β5/ITGB5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ITGB5 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ITGB5, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Integrin β5/ITGB5. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ITGB5 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Integrin β5/ITGB5 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Integrin β5/ITGB5 em células tumorais com expressão de ITGB5 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.