Integrin β4/ITGB4/CD104 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-400573-LAC

ITGB4 codifica a integrina β4 (CD104), uma subunidade de integrina que se liga à laminina e que se associa predominantemente à integrina α6 para formar a α6β4, um recetor de adesão fundamental em células epiteliais. Por meio da montagem de hemidesmossomas e da ligação a filamentos intermédios via plectina, a ITGB4 estabiliza a ancoragem celular à membrana basal, participando também em processos de sinalização que regulam polaridade, sobrevivência e migração. Fora das adesões estáveis, a α6β4 pode ativar vias como PI3K–AKT, MAPK e sinalização associada a adesões focais, modulando a remodelação do citoesqueleto e respostas ao stress. A expressão ou distribuição desregulada de ITGB4 é frequentemente investigada em disfunção da barreira epitelial, remodelação tecidular e fenótipos de invasão/metástase em cancro, tornando-a um ponto útil para estudar sinalização dependente de adesão e interações com o microambiente.

As Partículas de Ativação Lentivirais Integrin β4/ITGB4/CD104 (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de ITGB4 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais Integrin β4/ITGB4/CD104 (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição ITGB4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de Integrin β4/ITGB4/CD104. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo ITGB4 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.