Integrin β4/ITGB4/CD104 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-431434-ACT

Itgb4 codifica a integrina β4 (ITGB4/CD104), um recetor de adesão transmembranar que se associa principalmente à integrina α6 para formar α6β4, um recetor-chave de laminina na ancoragem do epitélio à membrana basal. Por meio da montagem de hemidesmossomas e da comunicação cruzada com a adesão focal e a sinalização por fatores de crescimento, a ITGB4 ajuda a coordenar a polaridade celular, a migração e vias de sobrevivência, incluindo a sinalização PI3K–AKT e MAPK. Alterações na expressão ou na sinalização de ITGB4 estão associadas a mudanças na integridade epitelial, no comportamento invasivo e na remodelação da matriz extracelular, tornando-a relevante para estudos de progressão de carcinomas, reparação de feridas e remodelação tecidular inflamatória. Em sistemas murinos, Itgb4 é frequentemente utilizado para dissecar interações epitélio–estroma e redes de sinalização dependentes de adesão em modelos organotípicos e in vivo.

Integrin β4/ITGB4/CD104 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Itgb4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Integrin β4/ITGB4/CD104 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Itgb4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Itgb4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Integrin β4/ITGB4/CD104. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Itgb4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Integrin β4/ITGB4/CD104 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Integrin β4/ITGB4/CD104 em células tumorais com expressão de Itgb4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.