Integrin α4/ITGA4/CD49d Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-401336-LAC

ITGA4 codifica a integrina α4 (CD49d), uma subunidade α que forma heterodímeros com β1 (VLA-4) ou β7 para gerar recetores de adesão centrais para o tráfego de leucócitos e o homing tecidual. Ao ligar-se a ligandos como VCAM1 e fibronectina, a integrina α4 coordena interações célula–célula e célula–matriz que regulam a adesão firme, a migração transendotelial e a organização da sinapse imunitária. A sinalização de ITGA4 interliga-se com a dinâmica das adesões focais e com quinases a jusante, incluindo as vias FAK/Src, PI3K–AKT e MAPK, moldando a remodelação do citoesqueleto e sinais de sobrevivência em células móveis. A atividade desregulada da integrina α4 tem sido associada ao recrutamento de células inflamatórias e a patologia mediada pelo sistema imunitário, sendo amplamente estudada em neoplasias hematopoiéticas e em processos metastáticos, nos quais a adesão e as interações com o nicho influenciam a biologia da doença.

As Partículas de Ativação Lentivirais Integrin α4/ITGA4/CD49d (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de ITGA4 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais Integrin α4/ITGA4/CD49d (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição ITGA4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de Integrin α4/ITGA4/CD49d. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo ITGA4 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.