Integrin α3/ITGA3/CD49c Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400841-NIC

ITGA3 codifica a integrina α3 (CD49c), que forma principalmente um heterodímero com a integrina β1 para gerar um recetor de ligação à laminina que conecta a matriz extracelular ao citoesqueleto de actina. Este complexo de adesão regula a dinâmica das adesões focais, a polaridade celular e a sinalização “outside-in” através de vias como FAK/Src, PI3K–AKT e MAPK, influenciando assim a migração, a sobrevivência e as interações epitélio–mesenquimais. A integrina α3 é importante para a organização da membrana basal e a integridade do tecido epitelial, e alterações na atividade de ITGA3 têm sido associadas a comportamento celular invasivo, remodelação relacionada com fibrose e programas de reparação de feridas desregulados. Na investigação biomédica, ITGA3 é frequentemente estudado para dissecar a comunicação célula–matriz, a mecanotransdução e o tráfego e a morfogénese dependentes de laminina em modelos epiteliais e do microambiente tumoral.

Integrin α3/ITGA3/CD49c O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus ITGA3 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de ITGA3. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função ITGA3. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com ITGA3 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.