Integrin α3/ITGA3/CD49c Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-421161-ACT

Itga3 codifica a integrina α3 (ITGA3/CD49c), uma subunidade α que heterodimeriza com a β1 para formar um receptor de ligação à laminina, central para a adesão célula–matriz extracelular. Esse receptor coordena a montagem de adesões focais e a sinalização bidirecional por vias que incluem FAK/Src, PI3K–AKT e MAPK, influenciando a organização do citoesqueleto, a sobrevivência e a migração direcional. Em tecidos de camundongo, a ITGA3 sustenta interações de células epiteliais e endoteliais com membranas basais e contribui para a morfogênese, o reparo de feridas e a homeostase tecidual. A sinalização desregulada da integrina α3 e programas alterados de adesão celular são comumente estudados em contextos de comportamento invasivo, remodelamento associado à fibrose e microambientes inflamatórios.

Integrin α3/ITGA3/CD49c O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Itga3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Integrin α3/ITGA3/CD49c O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Itga3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Itga3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Integrin α3/ITGA3/CD49c. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Itga3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Integrin α3/ITGA3/CD49c no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Integrin α3/ITGA3/CD49c em células tumorais com expressão de Itga3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.