Integrin α2/ITGA2/CD49b Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400913-ACT

ITGA2 codifica a integrina α2 (CD49b), um recetor de adesão que se associa à integrina β1 para formar o complexo α2β1, um dos principais recetores de colagénio e laminina em muitos tipos de células epiteliais, endoteliais e do sistema imunitário. Ao ligar a interação com a matriz extracelular à sinalização intracelular, a α2β1 regula a montagem de adesões focais, a remodelação do citoesqueleto e a mecanotransdução através de vias que incluem FAK/SRC, PI3K–AKT e MAPK. A atividade de ITGA2 influencia a migração celular, a adesão plaquetária e a remodelação tecidular, e alterações na expressão ou na função têm sido associadas a fibrose, respostas inflamatórias e invasão e metastização de células tumorais. Como recetor de superfície com resultados de sinalização dependentes do contexto, ITGA2 é frequentemente estudado em biologia da matriz extracelular, “crosstalk” entre integrinas e modelos de interação célula–matriz.

Integrin α2/ITGA2/CD49b O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ITGA2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Integrin α2/ITGA2/CD49b O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ITGA2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ITGA2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Integrin α2/ITGA2/CD49b. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ITGA2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Integrin α2/ITGA2/CD49b no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Integrin α2/ITGA2/CD49b em células tumorais com expressão de ITGA2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.