INSIG-1 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-401381-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- INSIG-1O plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase INSIG-1 (h) e o Plasmídeo Double Nickase INSIG-1 (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para INSIG1. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:INSIG-1 Anticorpo (A-9): sc-390504
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
INSIG-1 Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-401381-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
INSIG-1 Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-401381-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
INSIG1 codifica o gene 1 induzido por insulina (INSIG-1), uma proteína de membrana do retículo endoplasmático que atua como sensor de esteróis e como um regulador negativo central da homeostase lipídica. A INSIG-1 liga-se à SCAP e às proteínas de ligação ao elemento regulador de esteróis (SREBPs) para reter o complexo SCAP–SREBP no RE em condições de abundância de esteróis, limitando assim o processamento de SREBP e a transcrição subsequente de genes biossintéticos de colesterol e ácidos graxos. Por meio desse ponto de controle, a INSIG-1 integra a regulação por feedback nas vias do mevalonato e da lipogênese e se relaciona com a degradação associada ao RE de componentes da via dos esteróis. A desregulação do sensoriamento de esteróis ligado a INSIG1 tem sido estudada em fenótipos metabólicos como dislipidemia, esteatose hepática e resistência à insulina, e também é relevante em contextos em que alterações no metabolismo lipídico sustentam a adaptação ao estresse celular.
INSIG-1 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus INSIG1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de INSIG1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função INSIG1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com INSIG1 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.