Plasmide CRISPR d'Activation (h) Inhibin β-B: sc-402060-ACT

INHBB code la sous-unité bêta B de l’inhibine humaine, un ligand de la superfamille du TGF-β qui forme des homodimères d’activine B ou des hétérodimères d’activine AB afin de réguler les décisions de destinée cellulaire et la signalisation endocrinienne. Les activines transmettent leurs signaux principalement via des récepteurs de type II/I à activité sérine/thréonine kinase, activant des programmes transcriptionnels dépendants de SMAD2/3, et influençant, selon le contexte, la prolifération, la différenciation, le remodelage de la matrice extracellulaire et les réponses inflammatoires. L’activité d’INHBB est pertinente pour la biologie de la reproduction et la fonction gonadique, et une altération de l’équilibre activine/inhibine a été associée à une croissance tissulaire et un remodelage dérégulés dans divers états pathologiques, notamment la fibrose et des réseaux de signalisation liés au cancer. Parce qu’INHBB intègre des signaux paracrines et autocrines, il est fréquemment étudié dans les voies qui contrôlent les programmes de développement et la régulation de l’expression génique médiée par le microenvironnement.

Inhibin β-B Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de INHBB sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Inhibin β-B Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus INHBB dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription INHBB, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Inhibin β-B. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus INHBB natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Inhibin β-B au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Inhibin β-B dans les cellules tumorales présentant une expression de INHBB silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.