Inhibin β-A Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402676-ACT

INHBA codifica a subunidade beta-A da inibina humana, que pode formar homodímeros para originar a activina A ou heterodimerizar com a subunidade alfa da inibina para formar a inibina A, moduladores-chave da endocrinologia reprodutiva e da homeostase tecidual. A sinalização activina/inibina envolve vias da superfamília TGF-β, com destaque para programas transcricionais mediados por SMAD2/3 que regulam a proliferação celular, a diferenciação, a remodelação da matriz extracelular e respostas inflamatórias. A atividade de INHBA tem sido implicada em processos de desenvolvimento e na reparação de feridas, e a sua expressão alterada é relatada em múltiplos contextos patológicos, incluindo fibrose e remodelação do microambiente associado a tumores. Como componente de ligando secretado, a beta-A da inibina também funciona como um nó que liga a sinalização parácrina a alterações subsequentes na expressão génica em diversos tipos celulares.

Inhibin β-A O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de INHBA sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Inhibin β-A O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus INHBA em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição INHBA, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Inhibin β-A. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus INHBA nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Inhibin β-A no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Inhibin β-A em células tumorais com expressão de INHBA silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.