INDOL1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403856-ACT

ヒトIDO2（indoleamine 2,3-dioxygenase 2；INDOL1）は、トリプトファン分解に関与するヘム依存性酵素であり、キヌレニン経路のフラックスや局所的なアミノ酸利用可能性の制御に寄与します。トリプトファン枯渇および下流のキヌレニン代謝産物を調節することで、IDO2は細胞のストレス応答、レドックスバランス、免疫制御性シグナル伝達プログラムに影響を及ぼし得ます。IDO2活性は、抗原提示、炎症メディエーター産生、代謝適応を形作る経路と交差しており、免疫回避、慢性炎症、腫瘍関連免疫代謝の研究において重要です。IDO2を含むキヌレニン経路酵素の制御異常は、がんや炎症性疾患の文脈で観察される免疫トーンや代謝表現型の変化と関連づけられています。

INDOL1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性IDO2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

INDOL1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における IDO2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はIDO2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性INDOL1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のIDO2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるINDOL1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびIDO2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるINDOL1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。