Importin-7 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403562-ACT

IPO7 codifica a importina-7, um receptor de transporte nuclear da família carioferina-β que medeia a importação, dependente de RanGTP, de proteínas-carga através do complexo do poro nuclear. A importina-7 sustenta a localização nuclear de diversos fatores, incluindo proteínas ribossômicas e proteínas regulatórias envolvidas no controle da transcrição, na organização da cromatina e na progressão do ciclo celular, conectando assim o tráfego nucleocitoplasmático à proteostase e à sinalização de crescimento. Por meio de seu papel na importação nuclear, a IPO7 influencia a biogênese de ribossomos e programas de resposta ao estresse que são frequentemente alterados em estados proliferativos. Transporte nuclear desregulado e expressão alterada de IPO7 têm sido associados a vias oncogênicas e a fenótipos de estabilidade genômica, tornando a IPO7 um ponto relevante para estudos mecanísticos do tráfego nuclear em células humanas.

Importin-7 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de IPO7 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Importin-7 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus IPO7 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição IPO7, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Importin-7. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus IPO7 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Importin-7 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Importin-7 em células tumorais com expressão de IPO7 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.