IMPACT CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-421126

概要

IMPACT（inositol monophosphatase domain containing 1）は、翻訳制御や栄養利用可能性への細胞適応に関与するとされる、保存性の高い細胞質タンパク質をコードします。哺乳類細胞では、IMPACTは統合ストレス応答の調節、特にeIF2α経路の制御や、代謝ストレス下での増殖・生存を形作るストレス誘導性の翻訳プログラムの制御に関連づけられてきました。こうしたつながりから、プロテオスタシスやアミノ酸センシングが神経機能、発生、ストレス耐性に影響する文脈でImpactが研究されており、翻訳チェックポイントが疾患に関連する表現型にどのように寄与するかを検討するための分子レベルの手がかりを提供します。

IMPACT CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるImpact遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Impact内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Impactのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、IMPACTタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、IMPACTシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Impact欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• IMPACTの機能に不可欠なImpactエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Impactゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• IMPACT CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびIMPACT CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Impact遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  IMPACT HDRプラスミド（m）および IMPACT HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはImpactホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のImpact標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。