ILKAP Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405879

Visão geral

ILKAP (fosfatase de serina/treonina 2C associada à quinase ligada a integrinas, integrin-linked kinase–associated serine/threonine phosphatase 2C) codifica uma fosfatase da família PP2C que se associa a complexos de sinalização ligados a integrinas e modula o controlo, dependente de fosforilação, da adesão celular e da organização do citoesqueleto. Ao desfosforilar substratos específicos em vias associadas a integrinas e à MEC (matriz extracelular), a ILKAP pode influenciar a migração celular, a mecanotransdução e os resultados da sinalização responsiva a fatores de crescimento. Alterações na expressão ou na atividade de ILKAP têm sido estudadas em contextos que envolvem desregulação da sinalização de adesão, respostas ao stress e reconfiguração de vias que sustenta fenótipos malignos. Como resultado, a ILKAP é frequentemente investigada em modelos de invasão de células tumorais, sinalização de sobrevivência e regulação, dependente de adesão, da proliferação.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO ILKAP (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene ILKAP em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do ILKAP, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do ILKAP na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína ILKAP.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de ILKAP para a investigação da sinalização de ILKAP, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) ILKAP críticos para a função ILKAP
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos ILKAP para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo ILKAP Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo ILKAP Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus ILKAP. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo ILKAP Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR ILKAP (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia ILKAP para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo ILKAP definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.