ILDR1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m2): sc-430649-ACT-2

O gene Ildr1 do camundongo codifica o receptor 1 contendo domínio do tipo imunoglobulina (ILDR1), uma proteína transmembrana de passagem única enriquecida nas junções apertadas tricelulares, onde ajuda a organizar a arquitetura da barreira epitelial e a regular a permeabilidade paracelular. A ILDR1 participa de processos de montagem e sinalização das junções, ligados à polaridade ápico-basal e ao tráfego de proteínas de membrana, apoiando uma adesão célula–célula coordenada em tecidos sensoriais e epiteliais. A disfunção da ILDR1 está associada a defeitos de junções apertadas e a alterações fisiopatológicas auditivas, tornando Ildr1 um alvo relevante para estudar mecanismos de perda auditiva e disfunção da barreira epitelial. A edição gênica de Ildr1 em camundongos permite a investigação in vivo e in vitro da biologia das junções tricelulares, da regulação de barreira específica por tecido e de mudanças transcriptômicas ou proteômicas a jusante em modelos de desenvolvimento do epitélio sensorial e de respostas ao estresse relevantes para doenças.

ILDR1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m2) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Ildr1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ILDR1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m2) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Ildr1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Ildr1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ILDR1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Ildr1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ILDR1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ILDR1 em células tumorais com expressão de Ildr1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.