IL-9 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-421119-ACT

O gene Il9 de camundongo codifica a interleucina-9 (IL-9), uma citocina pleiotrópica produzida predominantemente por células Th9 e outras populações linfoides ativadas, que modela a inflamação do tipo 2 e as respostas imunes nas mucosas. A IL-9 sinaliza por meio do complexo receptor de IL-9 para ativar vias JAK/STAT, particularmente a STAT5, promovendo, de forma dependente do contexto, a sobrevivência, a proliferação e funções efetoras em células-alvo como mastócitos, células T e compartimentos epiteliais. Esse eixo contribui para a regulação da imunidade de barreira e de circuitos inflamatórios implicados na inflamação das vias aéreas, em respostas alérgicas e na defesa contra parasitas, e se intersecciona com redes de citocinas envolvendo IL-4, IL-13 e TGF-β. Assim, a atividade desregulada de Il9 é frequentemente estudada em modelos de imunopatologia nos quais o remodelamento induzido por citocinas e o recrutamento de leucócitos são processos-chave.

IL-9 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Il9 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

IL-9 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Il9 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Il9, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de IL-9. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Il9 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de IL-9 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via IL-9 em células tumorais com expressão de Il9 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.