IL-9 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403774-ACT

O gene humano IL9 codifica a interleucina-9 (IL-9), uma citocina pleiotrópica produzida por células T ativadas, incluindo subpopulações Th9, que molda as respostas imunes nas barreiras mucosas. A IL-9 sinaliza por meio do complexo receptor de IL-9 para ativar a via JAK/STAT, particularmente a STAT5, e se integra a programas mais amplos impulsionados por citocinas que influenciam a diferenciação de linfócitos, a biologia de mastócitos e a função de células epiteliais. A atividade desregulada de IL-9 tem sido implicada em processos imunes inflamatórios e alérgicos e na modulação do microambiente tumoral-imune, tornando o IL9 um ponto útil para estudar redes de citocinas e a comunicação cruzada entre células imunes e o estroma. In vitro, a IL-9 é comumente investigada quanto ao seu impacto nos estados de ativação imune, nos perfis de secreção de citocinas e em programas transcricionais a jusante.

IL-9 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de IL9 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

IL-9 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus IL9 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição IL9, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de IL-9. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus IL9 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de IL-9 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via IL-9 em células tumorais com expressão de IL9 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.