IL-8RA Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401645-ACT

O CXCR1 humano codifica a IL-8RA (CXCR1), um receptor acoplado à proteína G que se liga à quimiocina CXC ELR+ CXCL8/IL-8 para regular a quimiotaxia de neutrófilos, a adesão firme e a ativação. A ligação do ligante desencadeia sinalização dependente de Gαi, com vias downstream como PLCβ/fluxo de Ca²⁺, PI3K–AKT, MAPK/ERK e pequenas GTPases, que coordenam a remodelação do citoesqueleto, a degranulação e a explosão respiratória. O tráfego leucocitário impulsionado por CXCR1 e a amplificação inflamatória são amplamente estudados na imunidade de mucosas e na inflamação associada a tumores, e a sinalização desregulada tem sido implicada em doenças inflamatórias crônicas e na progressão do câncer. Como receptor de quimiocinas de superfície celular, a IL-8RA também é usada como marcador e como nó funcional em estudos de biologia mieloide e de crosstalk do microambiente.

IL-8RA O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CXCR1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

IL-8RA O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CXCR1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CXCR1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de IL-8RA. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CXCR1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de IL-8RA no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via IL-8RA em células tumorais com expressão de CXCR1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.