IL-7 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402210-ACT

A IL7 humana codifica a interleucina-7 (IL-7), uma citocina derivada do estroma e do epitélio que sinaliza através do complexo do recetor de IL-7 para apoiar a sobrevivência, proliferação e diferenciação de linfócitos. A ligação de IL-7 ativa a via de sinalização JAK/STAT, particularmente STAT5, e integra-se com as vias PI3K–AKT e MAPK para regular a aptidão metabólica e programas antiapoptóticos nos compartimentos de células T e células B. Este eixo é central para a timopoiese, a homeostase periférica de células T e a manutenção da diversidade do repertório imunitário. A sinalização desregulada de IL-7/IL7R tem sido implicada em alterações do desenvolvimento imunitário e em mecanismos de doença inflamatória ou imunomediada, tornando a IL7 um alvo frequente em estudos de biologia dos linfócitos e de redes de sinalização imunitária.

IL-7 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de IL7 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

IL-7 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus IL7 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição IL7, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de IL-7. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus IL7 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de IL-7 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via IL-7 em células tumorais com expressão de IL7 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.