IL-6Rα Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400582-ACT

IL6R codifica a cadeia alfa do recetor humano de interleucina-6 (IL-6Rα), um componente de ligação ao ligando que medeia a responsividade celular à IL-6 e coordena a sinalização através do complexo correceptor gp130. A ativação do IL-6Rα promove a ativação a jusante das vias JAK/STAT3, MAPK/ERK e PI3K/AKT, moldando respostas de fase aguda, a diferenciação de leucócitos e a homeostase tecidular. O IL-6Rα também participa nas modalidades de sinalização clássica e trans-sinalização, que influenciam a dinâmica das redes de citocinas e os níveis basais de inflamação nos compartimentos imunitário e estromal. A expressão ou sinalização desregulada de IL6R está implicada em inflamação crónica e autoimunidade e é amplamente estudada em oncologia e biologia cardiovascular como um fator de remodelação do microambiente e de fenótipos inflamatórios sistémicos.

IL-6Rα O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de IL6R sem alterar a sequência de ADN subjacente.

IL-6Rα O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus IL6R em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição IL6R, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de IL-6Rα. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus IL6R nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de IL-6Rα no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via IL-6Rα em células tumorais com expressão de IL6R silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.