IL-4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402914-ACT

O IL4 humano codifica a interleucina-4 (IL-4), uma citocina pleiotrópica que molda as respostas imunes do tipo 2 ao atuar em células T, células B, macrófagos e células linfoides inatas. A IL-4 sinaliza principalmente por meio de complexos de receptores contendo IL-4Rα para ativar programas transcricionais JAK1/JAK3-STAT6, promovendo a polarização Th2, a mudança de classe em células B para IgE e a diferenciação alternativa (M2) de macrófagos. Por meio de interações com as vias NF-κB e PI3K–AKT, a IL-4 influencia a apresentação de antígenos, a produção de quimiocinas e a remodelação tecidual. A atividade desregulada de IL-4 está implicada em inflamação alérgica, asma, dermatite atópica e outras patologias mediadas pelo sistema imune, o que a torna um alvo valioso para dissecar o comportamento de redes impulsionadas por citocinas.

IL-4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de IL4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

IL-4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus IL4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição IL4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de IL-4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus IL4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de IL-4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via IL-4 em células tumorais com expressão de IL4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.