IL-33 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-417699-ACT

O gene humano **IL33** codifica a **IL-33**, uma citocina associada ao núcleo da família IL-1 que atua como uma *alarmina* liberada em resposta a estresse ou dano celular para ativar respostas imunes inatas e adaptativas. A IL-33 extracelular sinaliza principalmente por meio do complexo receptor **ST2/IL1RL1**, estimulando a ativação das vias **NF-κB** e **MAPK**, moldando a inflamação do tipo 2, a ativação de células mieloides e programas de reparo tecidual. A IL-33 influencia a comunicação cruzada entre epitélio, estroma e sistema imune em tecidos de barreira e tem sido implicada na inflamação alérgica das vias aéreas, em doenças atópicas e em outros contextos de inflamação crônica. A atividade desregulada de IL-33 também está associada à fibrose e a alterações na sinalização do microambiente tumoral, tornando-a um ponto relevante para estudos mecanísticos de circuitos inflamatórios.

IL-33 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de IL33 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

IL-33 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus IL33 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição IL33, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de IL-33. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus IL33 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de IL-33 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via IL-33 em células tumorais com expressão de IL33 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.