IL-3/IL-5/GM-CSFRβ Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401045-ACT

CSF2RB codifica a subunidade β comum compartilhada pelos complexos receptores de IL-3, IL-5 e GM-CSF, formando uma unidade de sinalização de alta afinidade com cadeias α específicas do ligante em células hematopoéticas e mieloides. Após a ligação da citocina, a subunidade β do receptor de IL-3/IL-5/GM-CSF inicia a sinalização JAK2/STAT5 e coordena as cascatas PI3K–AKT e MAPK/ERK para regular a sobrevivência, a proliferação, a diferenciação e a ativação funcional de progenitores. Esse nó receptor é central para programas inflamatórios e imunes dirigidos por citocinas, conectando a produção da medula óssea às respostas efetoras periféricas. A sinalização desregulada de CSF2RB é estudada no contexto de mielopoiese aberrante, alteração na ativação de leucócitos e mecanismos de doenças inflamatórias.

IL-3/IL-5/GM-CSFRβ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CSF2RB sem alterar a sequência de ADN subjacente.

IL-3/IL-5/GM-CSFRβ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CSF2RB em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CSF2RB, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de IL-3/IL-5/GM-CSFRβ. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CSF2RB nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de IL-3/IL-5/GM-CSFRβ no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via IL-3/IL-5/GM-CSFRβ em células tumorais com expressão de CSF2RB silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.