IL-2Rα Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401262-ACT

IL2RA codifica a cadeia alfa do receptor de interleucina-2 (IL-2Rα, CD25), um componente de alta afinidade do complexo receptor de IL-2 que modula a sensibilidade a citocinas em células T ativadas e em células T reguladoras. A ligação de IL-2 ao IL-2Rα promove a sinalização downstream via JAK/STAT, particularmente a ativação de STAT5, sustentando a proliferação e a diferenciação de linfócitos, bem como a tolerância imunológica. Alterações na expressão de IL2RA estão associadas à desregulação da homeostase imune e têm sido estudadas no contexto de autoimunidade, sinalização inflamatória e microambientes imunes tumorais. Como marcador de superfície de subpopulações de células T ativadas e reguladoras, o IL-2Rα é frequentemente usado para investigar transições de estado de células imunes e programas transcricionais conduzidos por citocinas.

IL-2Rα O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de IL2RA sem alterar a sequência de ADN subjacente.

IL-2Rα O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus IL2RA em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição IL2RA, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de IL-2Rα. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus IL2RA nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de IL-2Rα no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via IL-2Rα em células tumorais com expressão de IL2RA silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.