Plasmide CRISPR/Cas9 KO IL-28R (h): sc-402530

Présentation

IFNLR1 code la sous-unité alpha du récepteur de l’interleukine-28 (IL‑28Rα), composant de liaison au ligand du complexe récepteur des interférons de type III, qui s’associe à IL10RB pour médiatiser les réponses à l’IFN‑λ (IL‑28/IL‑29). La liaison au récepteur active la signalisation JAK–STAT, favorisant la formation du complexe STAT1/STAT2–IRF9 (ISGF3) et l’induction de gènes stimulés par les interférons, qui façonnent l’immunité innée des épithéliums et des sites barrières. L’expression d’IFNLR1 est enrichie dans les tissus épithéliaux, contribuant à une signalisation antivirale et inflammatoire compartimentée, distincte des voies des interférons de type I. Une dérégulation de la signalisation IFN‑λ/IFNLR1 a été associée à une altération de l’homéostasie immunitaire des muqueuses et à une susceptibilité accrue à des phénotypes de maladies inflammatoires et infectieuses dans les contextes respiratoire et gastro-intestinal.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO IL-28R (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène IFNLR1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du IFNLR1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert IFNLR1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine IL-28R.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en IFNLR1 pour l'étude de la signalisation de IL-28R, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de IFNLR1 essentiels à la fonction de IL-28R
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de IFNLR1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le IL-28R plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le IL-28R plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus IFNLR1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le IL-28R plasmide HDR (h) et le IL-28R (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie IFNLR1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles IFNLR1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.