Il-28a Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-437298-ACT

O gene Ifnl2 de camundongo codifica a interleucina-28a (IL-28A), um interferon do tipo III que sinaliza por meio do complexo receptor IFNLR1/IL10RB para ativar vias JAK–STAT e induzir genes estimulados por interferon, que moldam programas imunológicos antivirais e associados à função de barreira. A IL-28A influencia respostas de células epiteliais e mieloides, modulando a apresentação de antígenos, a produção de quimiocinas e a comunicação com sensores inatos, como receptores do tipo RIG-I e receptores do tipo Toll (TLRs). A atividade desregulada de interferon tipo III tem sido associada a alterações na inflamação de mucosas e na suscetibilidade à infecção viral, tornando o Ifnl2 um alvo útil para estudar a biologia de interferons, interações hospedeiro–patógeno e a regulação imune em modelos murinos.

Il-28a CRISPR/Cas9 KOPlasmid O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Ifnl2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Il-28a CRISPR/Cas9 KOPlasmid O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Ifnl2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Ifnl2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Il-28a CRISPR/Cas9 KOPlasmid. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Ifnl2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Il-28a CRISPR/Cas9 KOPlasmid no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Il-28a CRISPR/Cas9 KOPlasmid em células tumorais com expressão de Ifnl2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.