IL-27 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-434233-ACT

O gene Il27 do camundongo codifica a IL-27, uma citocina heterodimérica da família da IL-12 que sinaliza por meio do complexo receptor WSX-1 (IL-27RA)/gp130 para ativar as vias JAK/STAT, particularmente STAT1 e STAT3. A IL-27 modula o diálogo entre células apresentadoras de antígeno e linfócitos T ao moldar a diferenciação de linfócitos T auxiliares CD4+, sustentando a programação inicial de Th1 enquanto limita respostas Th17 e promove programas regulatórios associados à IL-10. Por meio desses efeitos imunorregulatórios, a IL-27 influencia circuitos inflamatórios ligados à imunidade de mucosas, autoimunidade e defesa do hospedeiro, sendo frequentemente estudada no contexto de inflamação crônica e remodelamento imune associado a tumores. Sua via se cruza com redes de sinalização do tipo interferon e do tipo IL-6, que coordenam a produção de citocinas, a expressão de quimiocinas e a função de células efetoras.

IL-27 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Il27 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

IL-27 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Il27 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Il27, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de IL-27. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Il27 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de IL-27 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via IL-27 em células tumorais com expressão de Il27 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.