IL-23 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401374-ACT

IL23A codifica a subunidade p19 da interleucina-23 (IL-23), uma citocina heterodimérica que sinaliza através do complexo do recetor de IL-23 para ativar vias JAK/STAT, particularmente a STAT3, e reforçar programas de expressão génica inflamatória. A IL-23 promove a expansão e a estabilização de respostas Th17 e apoia a produção de mediadores efetores como IL-17 e IL-22, ligando a deteção inata à imunidade adaptativa em tecidos de barreira. A desregulação da sinalização IL23A/IL-23 está implicada na ativação imunitária crónica e na patologia inflamatória, com forte relevância para a biologia de doenças autoimunes e inflamatórias. In vitro, o IL23A serve como um nó-chave para estudar a comunicação mediada por citocinas entre células mieloides, células T e compartimentos epiteliais.

IL-23 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de IL23A sem alterar a sequência de ADN subjacente.

IL-23 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus IL23A em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição IL23A, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de IL-23. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus IL23A nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de IL-23 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via IL-23 em células tumorais com expressão de IL23A silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.