IL-1RAcP Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402026-ACT

IL1RAP codifica a proteína acessória do receptor de interleucina‑1 (IL‑1RAcP), um co-receptor essencial que forma heterodímeros com IL1R1 ou IL1RL1 (ST2) para propagar a sinalização desencadeada por citocinas da família IL‑1. Após a ligação do ligante, a IL‑1RAcP ajuda a montar o complexo receptor e a recrutar proteínas adaptadoras como MyD88, iniciando cascatas dependentes de IRAK que ativam as vias de NF‑κB e MAPK para regular a expressão de genes inflamatórios. Esse eixo de sinalização influencia a ativação da imunidade inata, a produção de citocinas e a comunicação cruzada com respostas impulsionadas pelo inflamassoma. A sinalização associada ao IL1RAP, quando desregulada, é frequentemente estudada no contexto de inflamação crônica e de modulação imune associada ao microambiente tumoral, o que a torna relevante para estudos mecanísticos em modelos de imunologia e oncologia.

IL-1RAcP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de IL1RAP sem alterar a sequência de ADN subjacente.

IL-1RAcP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus IL1RAP em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição IL1RAP, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de IL-1RAcP. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus IL1RAP nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de IL-1RAcP no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via IL-1RAcP em células tumorais com expressão de IL1RAP silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.