IL-17RD Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405362-ACT

IL17RD codifica a IL-17RD (também conhecida como SEF), um regulador de sinalização transmembranar que modula vias de receptores tirosina-quinase, incluindo a sinalização MAPK/ERK induzida por FGF, e pode influenciar redes de sinalização inflamatória ligadas à biologia da família IL-17. Ao moldar a amplitude e a duração dos sinais na membrana plasmática, a IL-17RD contribui para decisões celulares que governam proliferação, diferenciação e respostas ao estresse. Alterações na expressão de IL17RD ou no contexto das vias associadas têm sido relacionadas a desregulação da sinalização por fatores de crescimento e a fenótipos associados à inflamação, tornando-o relevante para estudos mecanísticos de sinalização oncogênica, biologia epitelial e crosstalk associado ao sistema imune em células humanas.

IL-17RD O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de IL17RD sem alterar a sequência de ADN subjacente.

IL-17RD O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus IL17RD em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição IL17RD, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de IL-17RD. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus IL17RD nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de IL-17RD no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via IL-17RD em células tumorais com expressão de IL17RD silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.