Plasmide CRISPR d'Activation (h) IL-17RD: sc-405362-ACT

IL17RD code l’IL‑17RD (également connue sous le nom de SEF), un régulateur transmembranaire de la signalisation qui module les voies des récepteurs tyrosine kinases, notamment la signalisation MAPK/ERK induite par le FGF, et peut influencer des réseaux de signalisation inflammatoire liés à la biologie de la famille IL‑17. En modulant l’amplitude et la durée des signaux à la membrane plasmique, IL‑17RD contribue aux décisions cellulaires qui gouvernent la prolifération, la différenciation et les réponses au stress. Une expression altérée d’IL17RD ou des changements de contexte de voie ont été associés à une dérégulation de la signalisation des facteurs de croissance et à des phénotypes liés à l’inflammation, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques de la signalisation oncogénique, de la biologie épithéliale et du dialogue croisé associé à l’immunité dans les cellules humaines.

IL-17RD Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de IL17RD sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

IL-17RD Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus IL17RD dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription IL17RD, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de IL-17RD. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus IL17RD natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de IL-17RD au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie IL-17RD dans les cellules tumorales présentant une expression de IL17RD silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.