IL-17 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-421092-ACT

O gene murino Il17a codifica a IL-17A, uma citocina efetora característica das células Th17 e de outros linfócitos com perfil inato, que coordena o recrutamento de neutrófilos e a defesa antimicrobiana em tecidos de barreira. A IL-17A sinaliza por meio de IL-17RA/IL-17RC para ativar programas transcricionais dependentes de NF-κB, MAPK e C/EBP, que induzem quimiocinas como CXCL1/CXCL2 e mediadores inflamatórios, incluindo IL-6 e G-CSF. Essa via se integra a redes IL-23–STAT3 e atua em sinergia com a sinalização de TNF e da família IL-1 para amplificar a inflamação tecidual. A atividade desregulada de IL-17A é amplamente utilizada para modelar circuitos inflamatórios relevantes para patologia do tipo autoimune, imunobiologia de mucosas e inflamação associada a tumores em camundongos.

IL-17 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Il17a sem alterar a sequência de ADN subjacente.

IL-17 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Il17a em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Il17a, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de IL-17. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Il17a nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de IL-17 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via IL-17 em células tumorais com expressão de Il17a silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.