Plasmide CRISPR d'Activation (h) IL-17: sc-400293-ACT

L’IL17A humain code l’IL‑17A (IL‑17), une cytokine pro‑inflammatoire produite principalement par les cellules Th17 et d’autres lymphocytes de type inné, qui amplifie les réponses immunitaires tissulaires. L’IL‑17A transmet son signal via le complexe récepteur IL‑17RA/IL‑17RC afin d’activer des cascades dépendantes d’ACT1/TRAF6, déclenchant des programmes transcriptionnels NF‑κB, MAPK et C/EBP qui favorisent la production de chimiokines et le recrutement des neutrophiles. Cet axe coordonne la défense de l’hôte au niveau des sites barrières et module les interactions avec les voies IL‑23/STAT3 et TNF pour réguler des réseaux de gènes inflammatoires. Une activité dérégulée d’IL‑17A est fréquemment étudiée dans des modèles d’inflammation chronique et d’auto-immunité, notamment l’inflammation cutanée de type psoriasique, les maladies inflammatoires de l’intestin et les réponses inflammatoires des voies aériennes.

IL-17 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de IL17A sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

IL-17 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus IL17A dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription IL17A, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de IL-17. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus IL17A natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de IL-17 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie IL-17 dans les cellules tumorales présentant une expression de IL17A silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.