IL-15 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-421089-ACT

O gene Il15 de camundongo codifica a interleucina-15 (IL-15), uma citocina pleiotrópica que sustenta o desenvolvimento, a sobrevivência e a ativação de células NK e de células T CD8+ com fenótipo de memória. A IL-15 sinaliza por meio da cadeia β do receptor de IL-2/15 e da cadeia γ comum, com transapresentação mediada por IL-15Rα, ativando as vias JAK1/3–STAT5, PI3K–AKT e MAPK para regular a proliferação e programas citotóxicos. Por meio dessas redes, a IL-15 molda a vigilância imunológica antiviral e antitumoral e contribui para circuitos inflamatórios que influenciam a homeostase tecidual. A expressão desregulada de IL-15 tem sido implicada em patologias imunomediadas e em alterações na dinâmica de linfócitos, tornando o Il15 um nó útil para o estudo da imunidade dirigida por citocinas.

IL-15 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Il15 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

IL-15 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Il15 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Il15, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de IL-15. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Il15 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de IL-15 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via IL-15 em células tumorais com expressão de Il15 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.