IL-13 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402777-ACT

O IL13 humano codifica a interleucina-13 (IL-13), uma citocina secretada do tipo 2 que molda as respostas imunes ao sinalizar por meio de IL-13Rα1/IL-4Rα para ativar a via JAK–STAT6 e programas transcricionais a jusante. A IL-13 promove a polarização alternativa de macrófagos, a metaplasia de células caliciformes, a produção de muco e a ativação de fibroblastos, ligando-a à remodelação tecidual e à inflamação de barreiras. Em contextos hematopoéticos e epiteliais, a IL-13 interage com redes associadas a Th2 e pode modular a apresentação de antígenos e a expressão de quimiocinas. A sinalização desregulada de IL-13 está implicada na inflamação alérgica das vias aéreas, asma, dermatite atópica e processos fibróticos, tornando o IL13 um nó útil para estudos mecanísticos da imunidade do tipo 2.

IL-13 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de IL13 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

IL-13 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus IL13 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição IL13, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de IL-13. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus IL13 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de IL-13 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via IL-13 em células tumorais com expressão de IL13 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.