IL-10 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-421076-ACT

O gene Il10 de camundongo codifica a interleucina-10 (IL-10), uma citocina anti-inflamatória pleiotrópica que restringe a ativação imune inata e adaptativa para preservar a homeostase tecidual. A sinalização de IL-10 por meio do receptor de IL-10 ativa JAK1/TYK2 e STAT3 para suprimir a produção de citocinas pró-inflamatórias, limitar a maturação de células apresentadoras de antígeno e modular a polarização de células T e programas regulatórios. Esse eixo é central para a tolerância imunológica nas mucosas e para a resolução da inflamação, com relevância para patologias mediadas pelo sistema imune, como inflamação do tipo colite, imunorregulação associada a infecções crônicas e supressão imune no microambiente tumoral em modelos experimentais. Alterações na atividade de IL-10 são, portanto, amplamente estudadas em macrófagos, células dendríticas, células B e células T para compreender redes de citocinas e circuitos de sinalização inflamatória.

IL-10 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Il10 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

IL-10 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Il10 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Il10, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de IL-10. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Il10 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de IL-10 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via IL-10 em células tumorais com expressão de Il10 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.