IL-1 beta/IL1B Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-421097-ACT

O gene **Il1b** em camundongos codifica a interleucina‑1 beta (IL‑1β), uma potente citocina pró-inflamatória produzida principalmente por células mieloides após o reconhecimento pela imunidade inata. A pró‑IL‑1β é induzida transcricionalmente a jusante da sinalização de receptores de reconhecimento de padrões por meio das vias NF‑κB e MAPK e, posteriormente, é processada pela caspase‑1 ativada pelo inflamassoma para gerar a forma madura secretada. A sinalização de IL‑1β via IL‑1R1 ativa cascatas dependentes de MyD88 que amplificam redes de citocinas e quimiocinas, promovendo recrutamento de leucócitos, respostas febris e remodelamento tecidual. A atividade desregulada de **Il1b** está implicada em processos autoinflamatórios e autoimunes, em modelos de doenças inflamatórias crônicas, em neuroinflamação e em inflamação associada a tumores em camundongos.

IL-1 beta/IL1B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Il1b sem alterar a sequência de ADN subjacente.

IL-1 beta/IL1B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Il1b em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Il1b, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de IL-1 beta/IL1B. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Il1b nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de IL-1 beta/IL1B no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via IL-1 beta/IL1B em células tumorais com expressão de Il1b silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.