Plasmide CRISPR d'Activation (m) Ikaros: sc-423820-ACT

Le gène murin Ikzf1 code Ikaros, un facteur de transcription à doigts de zinc qui orchestre l’engagement et la maturation des lignées lymphoïdes en régulant l’accessibilité de la chromatine et des programmes d’expression génique spécifiques des différents stades. Ikaros s’intègre à des réseaux transcriptionnels et épigénétiques qui contrôlent la signalisation des récepteurs des cellules B et T, les voies sensibles aux cytokines et les points de contrôle du cycle cellulaire afin de maintenir l’homéostasie hématopoïétique. Une perturbation de l’expression ou de la fonction d’Ikzf1 est associée à une lymphopoïèse dérégulée et à une différenciation aberrante des cellules immunitaires, ce qui en fait une cible fréquente dans les études des mécanismes des maladies hématologiques et du développement du système immunitaire.

Ikaros Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Ikzf1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Ikaros Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Ikzf1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Ikzf1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Ikaros. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Ikzf1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Ikaros au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Ikaros dans les cellules tumorales présentant une expression de Ikzf1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.