Ikaros Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-423820-ACT

O gene Ikzf1 de camundongo codifica Ikaros, um fator de transcrição com dedos de zinco que coordena o comprometimento e a maturação da linhagem linfoide ao regular a acessibilidade da cromatina e programas de expressão gênica específicos de cada estágio. Ikaros se integra a redes transcricionais e epigenéticas que controlam a sinalização dos receptores de células B e T, vias responsivas a citocinas e checkpoints do ciclo celular, mantendo a homeostase hematopoética. Alterações na expressão ou na função de Ikzf1 estão associadas à linfopoiese desregulada e à diferenciação anormal de células imunes, tornando-o um alvo frequente em estudos sobre mecanismos de doenças hematológicas e o desenvolvimento do sistema imunológico.

Ikaros O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Ikzf1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Ikaros O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Ikzf1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Ikzf1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Ikaros. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Ikzf1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Ikaros no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Ikaros em células tumorais com expressão de Ikzf1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.