IGFBP5 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400945-ACT

IGFBP5 (proteína 5 de ligação ao fator de crescimento semelhante à insulina) é uma proteína secretada que se liga a IGF e modula a biodisponibilidade e a sinalização de IGF1/IGF2 através do eixo IGF, influenciando a atividade das vias PI3K–AKT e MAPK. Ao regular a responsividade a fatores de crescimento e as interações com a matriz extracelular, a IGFBP5 contribui para o controle da proliferação, sobrevivência, diferenciação e migração celulares, bem como para a remodelação tecidual. Alterações na expressão de IGFBP5 têm sido associadas a mudanças em programas ligados à fibrose, à biologia do estroma e à dinâmica do microambiente tumoral, tornando-a um nó útil para estudar a regulação do crescimento dependente do contexto. Como uma proteína humana com funções tanto dependentes quanto independentes de IGF, a IGFBP5 é frequentemente investigada em vias que governam a senescência celular e respostas do desenvolvimento ou a lesões.

IGFBP5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de IGFBP5 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

IGFBP5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus IGFBP5 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição IGFBP5, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de IGFBP5. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus IGFBP5 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de IGFBP5 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via IGFBP5 em células tumorais com expressão de IGFBP5 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.