IGFBP2 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (m): sc-421063-LAC

Igfbp2 codifica a proteína ligadora do fator de crescimento semelhante à insulina 2 (IGFBP2), um regulador secretado da biodisponibilidade de IGF que modula a intensidade da sinalização de IGF1/IGF2, o engajamento dos receptores e a atividade a jusante das vias PI3K–AKT e MAPK. Ao tamponar e localizar ligantes de IGF no meio extracelular, a IGFBP2 influencia a proliferação, a sobrevivência e a migração celulares, bem como as interações com a matriz, podendo moldar o crescimento tecidual e a homeostase metabólica. Em modelos murinos, alterações na expressão de Igfbp2 foram associadas a mudanças na adiposidade e na sensibilidade à insulina, além de efeitos dependentes do contexto sobre inflamação e remodelamento tecidual. Essas propriedades tornam Igfbp2 um alvo útil para estudar a dinâmica da sinalização por fatores de crescimento, a biologia do microambiente tumoral e o crosstalk endócrino–parácrino em estados relevantes ao desenvolvimento e à doença.

As Partículas de Ativação Lentivirais IGFBP2 (m) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de Igfbp2 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais IGFBP2 (m) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição Igfbp2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de IGFBP2. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo Igfbp2 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.