IGF2R/M6PR Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401697-ACT

IGF2R codifica o receptor de manose-6-fosfato independente de cátions (IGF2R/M6PR), um receptor multifuncional de triagem endossomal que transporta hidrolases lisossomais marcadas com M6P do Golgi para endossomos e lisossomos, ao mesmo tempo que também medeia a captação e a depuração de ligantes extracelulares. Ao ligar-se ao fator de crescimento semelhante à insulina 2 (IGF2) e regular a disponibilidade do ligante, o IGF2R influencia redes de sinalização de fatores de crescimento e programas de proliferação celular. O IGF2R/M6PR participa na biogênese de lisossomos, na reciclagem de endossomo para Golgi e em vias de proteostase que moldam o metabolismo e as respostas ao stress. A desregulação ou perda da função de IGF2R tem sido associada a alterações no tráfego de enzimas lisossomais e a sinalização aberrante de IGF2, contextos frequentemente explorados na biologia do cancro, na biologia do desenvolvimento e na investigação de disfunções lisossomais.

IGF2R/M6PR O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de IGF2R sem alterar a sequência de ADN subjacente.

IGF2R/M6PR O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus IGF2R em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição IGF2R, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de IGF2R/M6PR. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus IGF2R nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de IGF2R/M6PR no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via IGF2R/M6PR em células tumorais com expressão de IGF2R silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.