IFN-γRβ Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402794-ACT

IFNGR2 codifica o receptor 2 do interferão gama (IFN-γRβ), a subunidade acessória de sinalização do complexo recetor de IFN-γ, que atua em parceria com o IFNGR1 para transmitir sinais do interferão do tipo II. A ligação do ligando promove a ativação de JAK1/JAK2 associadas ao recetor, a fosforilação de STAT1 e programas transcricionais que moldam o processamento e a apresentação de antigénios, a ativação de macrófagos e as defesas antimicrobianas. Por esta via, o IFNGR2 influencia a comunicação cruzada da sinalização inflamatória com as redes IRF e NF-κB e contribui para respostas intrínsecas da célula a citocinas imunitárias. A perturbação da sinalização do recetor de IFN-γ é relevante para estudos de desregulação imunitária, alterações nas interações hospedeiro–patógeno e mecanismos que modulam a vigilância imunitária antitumoral em sistemas modelo humanos.

IFN-γRβ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de IFNGR2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

IFN-γRβ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus IFNGR2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição IFNGR2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de IFN-γRβ. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus IFNGR2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de IFN-γRβ no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via IFN-γRβ em células tumorais com expressão de IFNGR2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.