IFITM5 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-407248

Visão geral

IFITM5 (proteína transmembrana 5 induzida por interferon, também conhecida como BRIL) é uma proteína de membrana restrita ao tecido ósseo, enriquecida em osteoblastos e osteócitos, que contribui para o desenvolvimento e a mineralização do esqueleto. Ela participa de programas de diferenciação de osteoblastos e influencia a deposição da matriz extracelular e a formação de hidroxiapatita, conectando a sinalização associada à membrana à maturação da matriz óssea. Alterações genéticas em IFITM5 estão associadas à osteogênese imperfeita tipo V e a fenótipos de remodelação óssea anormal, tornando-a relevante para o estudo de relações genótipo–fenótipo em distúrbios esqueléticos hereditários. Assim, IFITM5 é um ponto de entrada molecular útil para investigar vias que controlam a função dos osteoblastos, a organização da matriz e a homeostase do tecido ósseo.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO IFITM5 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene IFITM5 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do IFITM5, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do IFITM5 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína IFITM5.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de IFITM5 para a investigação da sinalização de IFITM5, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) IFITM5 críticos para a função IFITM5
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos IFITM5 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo IFITM5 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo IFITM5 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus IFITM5. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo IFITM5 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR IFITM5 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia IFITM5 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo IFITM5 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.