IFITM1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-416878-ACT

A proteína transmembrana induzida por interferon 1 (IFITM1) é um pequeno gene estimulado por interferon, associado à membrana, que modula a sinalização imune inata e restringe a entrada e a replicação de diversos vírus envelopados ao alterar propriedades de membrana e o tráfego endossomal. Sua expressão é induzida a jusante das vias de interferon tipo I/II por meio da sinalização JAK–STAT e contribui para programas celulares de estado antiviral e para interações imunoepiteliais. A IFITM1 também participa de processos ligados à adesão celular, proliferação e respostas ao estresse, conectando a sinalização por interferon a redes mais amplas de remodelamento transcricional e de membranas. A expressão desregulada de IFITM1 tem sido relatada em contextos inflamatórios e em múltiplos cenários de câncer, tornando-a um marcador útil e um nó funcional para estudos de interações hospedeiro–patógeno e de respostas ao interferon associadas a tumores.

IFITM1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de IFITM1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

IFITM1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus IFITM1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição IFITM1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de IFITM1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus IFITM1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de IFITM1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via IFITM1 em células tumorais com expressão de IFITM1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.