Plásmido CRISPR de Activación (h) IFIT5: sc-406044-ACT

El IFIT5 humano (proteína inducida por interferón con repeticiones de tetratricopeptido 5) es el producto de un gen estimulado por interferón que participa en la defensa inmunitaria innata al unirse a especies de ARN, con preferencia por el ARN viral 5′ trifosforilado, y al modular la señalización antiviral aguas abajo. IFIT5 contribuye a las respuestas de interferón de tipo I y modula procesos de vigilancia del ARN que influyen en la traducción celular y en los programas de expresión génica inflamatoria. A través de estas actividades, IFIT5 se estudia comúnmente en el contexto de las interacciones huésped–patógeno y de estados impulsados por interferón, incluida la inflamación crónica y la señalización inmunitaria asociada a tumores. La alteración de la expresión de IFIT5 se ha relacionado con cambios en las redes de citocinas y en fenotipos del metabolismo del ARN relevantes para estudios mecanísticos de la desregulación inmunitaria.

IFIT5 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de IFIT5 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

IFIT5 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus IFIT5 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional IFIT5, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de IFIT5. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo IFIT5 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de IFIT5 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía IFIT5 en células tumorales con expresión de IFIT5 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.