IFIT3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403557-ACT

A proteína induzida por interferão com repetições tetratricopeptídicas 3 (IFIT3) é um produto de um gene estimulado por interferão que amplifica as defesas antivirais inatas a jusante do interferão do tipo I e da sinalização de recetores de reconhecimento de padrões. A IFIT3 atua em complexos citoplasmáticos IFIT para modular a tradução e a deteção de RNA, influenciando a indução de ISGs, a saída de sinalização JAK–STAT e programas transcricionais inflamatórios. Ao moldar a magnitude e a persistência das respostas ao interferão, a IFIT3 é frequentemente estudada no contexto de interações hospedeiro–patógeno, regulação imunitária e stress celular impulsionado por interferão. A expressão desregulada de IFIT3 tem sido associada a microambientes imunitários alterados e a estados inflamatórios, sustentando a sua relevância em estudos mecanísticos de biologia de infeções e processos de doença associados ao sistema imunitário.

IFIT3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de IFIT3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

IFIT3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus IFIT3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição IFIT3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de IFIT3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus IFIT3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de IFIT3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via IFIT3 em células tumorais com expressão de IFIT3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.